Жизнь Леонардо да Винчи начинается в Винчи, где он родился в 1452 году, проходит через Милан, Флоренцию и Рим и завершается в Амбуазе во Франции, где он умер в 1519 году и был похоронен в замке.
Маршрут охватывает шесть мест, связанных с его жизнью: Музей Леонардо в Винчи, Санта-Мария-делле-Грацие в Милане, Палаццо Веккьо во Флоренции, двор Бельведер в Риме, Кло-Люсе и замок Амбуаз. Где именно сегодня покоятся его останки, известно лишь предположительно.
Роман был запрещён в Советском Союзе, поэтому Дэвид Лин не мог снимать свою эпопею там. Вместо этого он выстроил Москву в поле под Мадридом, превратил сосновые леса Сории в Урал и отправил вторую съёмочную группу в снега Финляндии.
Маршрут идёт за сюжетом по порядку, от плотины из рамочной истории до ледяного дворца в Варыкине, и показывает, где на самом деле снимали каждую сцену. Большинство меток обозначают общие районы, а не точные позиции камеры.
Флоренция, 1476 год: юный Эцио Аудиторе видит, как его отца и братьев вешают по ложному обвинению, и следующую четверть века охотится на виновных — по Тоскане, Романье и Венеции, вплоть до самого Ватикана. Игра Ubisoft 2009 года воссоздала Италию Возрождения так, чтобы по ней можно было лазать и бегать по крышам, а вымышленную вражду ассасинов и тамплиеров смешала с настоящими людьми: Медичи и Пацци, Леонардо да Винчи, Катериной Сфорцей и папой из рода Борджиа.
Маршрут проходит по настоящим зданиям и городам игры. Семья Аудиторе и её вилла вымышлены; большинство окружающих их событий придумано или переставлено по сравнению с историей.
